Géneros bacterianos: Pseusomonas.

El agente que origina más infecciones nosocomiales es Pseudomonas aeruginosa (principal patógeno humano). Hay apariciones de cepas multirresistentes a betalactámicos, carbapenems, aminoglucósidos y fluoroquinolonas.

La frecuencia de infecciones nosocomiales varía de un hospital a otro, oscila entre 3 y 4 por cada 100 pacientes.

Este género forma parte de los patógenos oportunistas. Se encuentra en suelo, agua, plantas y animales.

P. aeruginosa fue aislada a partir de heridas cutáneas en 1882 por Gessard. Presentan una coloración verde brillante por la producción de piocianina (color azul) y de pioverdina (amarillo fluorescente). Piomelanina (marrón) y piorrubina (rojo).

Forma colonias redondas, lisas, color verde fluorescente, aunque puede producir múltiples tipos de colonia y da la impresión de un cultivo de especies bacterianas mixtas.

• Oxidasa positiva.
• Crece a temperaturas superiores a 42°C. Aunque algunas especies crecen a 4°C.

Múltiples especies que se consideraban dentro de este género, ahora conforman al género Burkholderia:

• Xanthomonas.
• P. mallei.
• P. cepacia.
• P. pseudomallei.

Infección:

• Colonización: Unión a mucosas o piel y provocan una invasión local.
• Destrucción tisular.
• Diseminación: provoca enfermedad sistémica.
• Keratitis.
• Fibrosis quística.
• Quemaduras.
• Hemodiálisis.

La clasificación de Pseudomonas se basa mediante el estudio de las similitudes de RNA ribosomal:

Características generales:

• Bacilos largos GRAM negativos. Aisladas, pares o cadenas cortas.
• Cápsula mucoide de exopolisacáridos.
• Aerobios obligados.
• No fermentadores de lactosa.
• Catalasa y oxidasa positivas (sin contar a Burkholderia mallei).
• Motilidad positiva.
• No esporulados.
• Degradan glucosa por vía oxidativa.
• Reducción parcial de nitratos o total.
• Reservorios:
• Nebulizadores.
• Soluciones de lavados.
• Equipos de terapia respiratoria.
• Sistemas de hemodialisis.
• Olor frutal, semejante al jugo de uva (amino-aceto-fenona).
• Resistencia a desinfectantes diluídos.
• Algunas cepas son hemolíticas.

Resultados de las pruebas:

Una de las pruebas concluyentes es el crecimiento a temperaturas superiores a 42°C.

Las colonias en agar cetrimida presentan su característico pigmento. La prueba de oxidasa permite la diferenciación de las enterobacterias.

Medio King A (agar pseudomonas P)

Este medio se utiliza para el aislamiento, la detección y la diferenciación de especies de Pseudomonas en función de la producción de piocianina. La peptona de gelatina es necesaria para el desarrollo bacteriano, la glicerina permite la producción de pigmentos, el magnesio y el potasio estimulan la producción de piocianina y piorrubina e inhiben la producción de fluoresceína.

Medio King B (agar Pseudomonas F)

Este medio se basa en la producción de fluoresceína. La tripteína y la peptona son la fuente de nutrientes, la glicerina al igual que el King A ayuda a la producción de pigmentos, la concentración de fosfatos estimula la producción de fluoresceína e inhibe la producción de piocianina y piorrubina.

Crecimiento en diferentes medios

:Crecen fácilmente sobre muchos medios pues Pseudomonas son nutricionalmente muy versátiles.

Factores de virulencia

• Pilis.
• Capsula de polisacaridos (glucocalix o exopolisacarido mucoide).
• Lipopolisacarido.
• Elastasas (destrucción de los tejidos).
• Proteasa.
• Colagenasa.
• Exotoxina A (inmunodepresora) y S (inhibe síntesis de proteínas).
• Fibrinolisina.
• Flagelo.
• Formación de biofilm.
• Piocianina (produce formas toxicas del oxígeno, aumenta liberación de IL8 y altera la función ciliar).
• Proteasa alcalina.
• Fosfolipasa C (destrucción tisular).
• Ramnolipido (inhibición de actividad ciliar).
• Exoenzima S y T (facilita la diseminación).
• Productora de carbapenemasa (resistencia a antibioticos) (P. aeruginosa).

Mecanismos de resistencia

• Inhibición de antibióticos por beta-lactamasas.
• Mutación del gen gyr A que genera resistencia a quinolonas.
• Disminución de la permeabilidad de la membrana externa.
• Enzimas modificadoras de aminoglucósidos como las AAC(G´)II que confiere resistencia conjunta a gentamicinas, trobamicina y netilmicina.

Alginato

Polímero de polisacáridos, que facilita la adherencia a la superficie epitelial pulmonar, es una barrera para los fagocitos, para los antibióticos, inhibe a los anticuerpos y atenúa la respuesta del hospedero.

• Conversión de alginato + a -.
• En pacientes es la + y ambiental es -.
• Tiene genes reguladores.
• Neutraliza radicales de oxígeno.
• Obstruye vías aéreas.
• Mecanismo de adherencia, formación de microcolonias.

Diagnostico

Se basa en la morfología colonial, la prueba de oxidasa, los pigmentos, el olor y el crecimiento a 42°C (identifica P. aeruginosa).

Las muestras que se utilizan pueden ser lesiones cutáneas, pus, orina, sangre, LCR o esputo.

No fermenta lactosa.

Crecimiento en agar citrato dexosicolato.

Crecimiento en AMC.

Recupera fácilmente al m.o., se recomienda como medio selectivo, contien cetrimida (detergente) que inhibe bacterias Gram (-), favorece producción de piocianinas (color azul verdoso).

Medio NFL (Prueba de fluorescencia - desnitrificación) Determina la reducción de NO3 a N2, Producción de fluorescencia.

Agar Tech Promueve la aparición de color verde debido a las piocianinas

Medio de D4 de Kado y Heskett

El dodecil sulfato de Sodio elimina contaminantes que alteran componentes de la superficie celular sus desventajas son que crecen otras bacterias G(-), no se observa fluorescencia

Biorremediación

Pseudomonas putida es un microorganismo de la putrefacción y que puede resistir los efectos nocivos de solventes orgánicos.

P. putida mt-2 (pWWO) es capaz de descontaminar de sustancias orgánicas como el tolueno, uno de los componentes de la gasolina.

Se puede utilizar para realizar bioremediación, en la purificación del suelo y del agua subterránea transformando muchas sustancias orgánicas tóxicas a inofensivas.