Géneros bacterianos: Brucella

El género bacteriano Brucella cuenta con una amplia relevancia puesto que es el responsable de la famosa fiebre ondulante o del mediterráneo, esto únicamente en humanos. Brucella recibe su nombre de Sir David Bruce, el cual fue el investigador que reconoció por primera vez el microorganismo como causa de la fiebre ondulante.

Los resultados de las pruebas bioquímicas primarias (aquellas que permiten orientar hacia el genero bacteriano):

• Cocobacilos GRAM negativos sin agrupación aparente. Tienen un tamaño de 0.5 a 0.7 um.
• Catalasa y oxidasa positivos.
• Motilidad negativa.
• Aerobios (aunque algunas cepas ocupan CO2).
• Al realizar la prueba OF son oxidativos o anaerobios facultativos.
• Para crecer este genero ocupa medios enriquecidos como el agar sangre, chocolate, albimi y el agar suero dextrosa.

En medio TSA las cepas lisas de este género son circulares, convexas con bordes regulares, translucidas y de color ámbar.

Al ser bacterias GRAM negativas cuentan con LPS (lipopolisacarido), todas las cepas lisas presentan el antígeno A y el M, descritos en 1932 por Wilson y Miles. El antígeno M es un polímero lineal formado por unidades repetitivas de pentasacáridos integrados por un azúcar ligado por enlaces alfa 1, 3 y cuatro por unión alfa 1, 2. Respecto al antígeno A este es un polímero lineal con enlaces alfa 1, 2 esencialmente. Las cepas rugosas tienen al antígeno R y carecen de quinovosa mina.

Sistema BvrR / BvrS, que permiten la interacción con la superficie de la célula huésped, la formación de un BCV temprano (Vacuola que contiene Brucella) y la interacción con el retículo endoplásmico (ER) cuando las bacterias se multiplican. Factor de virulencia de Brucella A. La expresión de este se induce en los macrófagos, a través de la fagosomeacidificación. Presumiblemente, esta proteína está involucrada en la formación del nicho intracelular de replicación. La función BvfA no se identifica con precisión (Lavigne et al., 2005). También cuenta con Dismutasa superoxido, catalasa, ureasa, citocromo oxidasa, Alquil hidroperóxido reductasa y óxido nítrico reductasa.

Puede sobrevivir en temperaturas de refrigeración y congelación, pero el mínimo para poder desarrollarse es 25ºC, con un límite máximo de 40ºC, aunque su temperatura ideal es de 37ºC. En cuanto al pH se desarrolla en el intervalo de 4-7.4, siendo 7 el óptimo.

Patogénesis

Llega a mucosas y a sangre para causar sepsis, después poliartralgia pudiendo alojarse en médula ósea. Es capaz de sobrevivir de forma intracelular (por uniones GAP) en macreofagos y en el resto de células. Las células dendríticas y los trofoblastos son las principales células blanco. Se caracteriza esta infección en tejidos linfoides y lesiones inflamatorias. Interacciona con ,PrPc, SR-A y las balsas lipídicas celulares. Deriva a beta-1,2-glucan de las vacuolas. Utiliza al sistema de secreción tipo 4, lo cual junto con el LPS es el causante de la infección gastrointestinal. Se transmite por alimentos lácteos y cárnicos. Se incuban en un periodo de 10 a 14 días. Entra de forma oral (alimentos lácteos), respiratoria (inhalación de material contaminado) y contacto (manejo de vísceras, sangre y heces de los animales).

La brucelosis se clasifica en formas agudas (no es tan fácil detectarla, necesitando descartar salmonelosis, tifoidea, dengue, paludismo, tuberculosis, leptospirosis) y crónicas (no subclínica, subaguda, bacteremia, recurrente y crónica). Las personas de alto riesgo debido al contacto repetido con los animales enfermos. Lisas más virulentas. Duración aproximada es de dos semanas.

Síntomas

• Enfermedad febril ambulante (40°C).
• Postración.
• Anorexia.
• Conjuntivitis.
• Recaídas frecuentes.
• Transpiración.

La fiebre de malta en la etapa aguda no siempre se identifica con facilidad, ya que los síntomas podrían ser la expresión de otras enfermedades febriles comunes en nuestro medio. En consecuencia se tienen que descartar enfermedades como salmonelosis, tifoidea, dengue, paludismo, tuberculosis, leptospirosis y otras prevalentes en las zonas donde se presenten los casos.

Diagnostico

Se detecta por aislamiento de brucella o un título de aglutinación mayor o igual a 1:160 y prueba de presencia de 2 mercaptoetanol que debe ser mayor o igual a 1:80.

El diagnostico se realiza mediante pruebas indirectas, tamiz y confirmatorias.

    Pruebas indirectas:

• Aglutinación lenta en tubo de Wright (1:160).
• Prueba de aglutinación con y sin 2-mepcaptoetanol (>1:20).
• Reacción de Huddleson (>1:40).

    Tamiz:

• Rosa de bengala.

    Confirmatorias:

• Coombs.
• Fijación del complemento.

Prueba de rutina

La prueba serológica se hace en un tubo con antígeno blanco diluido en 1:100, en una solución fenolada pH 7.2, es capaz de detectar IgG e IgM, se lee en 48 horas. Prueba de rosa de bengala: usa un antígeno teñido con rosa de bengala sin diluir, en un pH de 3.6, esto inactiva IgM, esta prueba a diferencia de la anterior es cualitativa y se lee a los 8 minutos. Para realizar las pruebas de identificación se ajusta con el tubo 4 del nefelómetro de Mac Farland en caldo soya tripticaseína o caldo brucella.

Pruebas bioquímicas:

• Medio de Kigler.
• Urea de Christensen.
• Medio SIM.
• Citrato de Simmons.
• Producción de H2S (acetato de plomo como indicador) en agar soya tripticaseina inclinado.

Pruebas especiales:

• Requerimientos de CO2.
• Medio de kigler (ácido y gas).
• Urea de christensen.
• Citrato de simmons.
• SIM.
• Colorantes (se realizan siembras en presencia de colorantes: tionina, fucsina básica, safranina y azul de tionina. (5 estrías)).

Dilución 1:1000. Las cepas lisas no aglutinan, las rugosas si y las mucoides generan filamentos.

Tablas de identificación de las diferentes especies de Brucella:

Característica	Brucella melitensis	Brucella abortus	Brucella suis
Requerimiento de CO2	-	+	-
Producción de H2S	-	+	+
Producción de ureasa	Débil	Débil	Débil

Desarrollo en medio con colorante

Colorante	Brucella melitensis	Brucella abortus	Brucella suis
Fucsina básica	+	+	-
Tionina	+	-	+

Pruebas bioquímicas para identificar especies de Brucella

Característica	Brucella melitensis	Brucella abortus	Brucella suis
KIA/TSI	No	No	No
Oxidasa	+	+	+
Catalasa	+	+	+
Movilidad	-	-	-
Nitritos	+	+	+
Lisina	-	-	+
Ureasa	+	+	+
Glucosa	+	+	+
Xilosa	-	-	+
Manitol	-	-	-
Lactosa	-	-	-

Especies más importantes:

• Brucella abortus (9 biotipos), causa abortos principalmente en bovinos y mal de cruz en equinos. Se encuentra presente en vacas, camellos y búfalos. Se causan los abortos en animales debido a la presencia de eritritol el cual es un factor de crecimiento de las bacterias, y el eritritol no esta presente en humanos, por eso no causa abortos en humanos.
• Brucella mellitensis (3 biotipos), causa abortos en ovinos y caprinos. También se encuentra presente en cabras y camellos.
• Brucella suis (4 biotipos) causa infertilidad y abortos en cerdos.
• Brucella ovis, epididimitis e infertilidad en ovinos.
• Brucella canis, abortos en perros.
• Brucella neotomae la cual se encuentra en las ratas del desierto.

Especie	Biovariedad	Patogenicidad para el hombre	Huesped natural preferido	Contagio ocasional
Brucella mellitensis	1-3	Alta	Cabra y ovejas
Brucella abortus	1-7	Moderada	Bovinos	Frecuente
Brucella suis	1	Alta	Cerdos	Frecuente
Brucella suis	2	Sin notificación	Cerdos y liebres	Frecuente
Brucella suis	3	Alta	Cerdos	Frecuente
Brucella suis	4	Moderada	Renos	Frecuente
Brucella suis	5	Alta	Cerdos	Frecuente
Brucella ovis		Sin notificación	Ovejas
Brucella neotomae		Sin notificación	Ratas
Brucella canis		Baja	Perros
Brucella mans			Delfinas, morsas y mamíferos marinos

Profilaxis

• Vacunación o sacrificio de los animales.
• Guantes, trajes y gafas protectoras.
• Pasteurización.

Tratamiento

• Tetraciclina 500 mg, 6 horas por 21 días con estreptomicina 1 g por vía intramuscular por 21 días.

• Rifampicina y trimetoprim/sulfametoxazol,

• Rifampicina y doxiciclina.